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科研服務(wù)

SCIENTIFIC SERVICE

熒光定量PCR檢測/WesternBlot

熒光定量PCR檢測服務(wù)

　　1.服務(wù)描述

　　熒光定量PCR技術(shù)(Fluorescence Quantitative Real Time PCR，RT-PCR)是在常規PCR技術(shù)的基礎上引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)。該熒光物質(zhì)能夠隨著(zhù)PCR反應產(chǎn)物的不斷累加，產(chǎn)生成比例的熒光信號強度。這樣就可以通過(guò)監測熒光強度的變化來(lái)對PCR反應進(jìn)行實(shí)時(shí)的監測。目前，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)已經(jīng)廣泛的應用于生物基礎科學(xué)研究、醫學(xué)臨床診斷、疾病研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域。本公司可根據您的科研需求，為您提供SYBR Green染料法或TaqMan探針?lè )▽?shí)時(shí)熒光定量PCR檢測服務(wù)。通過(guò)對DNA或RNA的熒光定量PCR監測, 實(shí)現對基因的相對定量、絕對定量和定性分析。

　　

　　2.服務(wù)內容

　　1：mRNA 的定量分析：

　　熒光定量PCR可以利用內參基因對實(shí)驗基因的表達進(jìn)行相對定量分析，也可以通過(guò)外用標準品對實(shí)驗基因進(jìn)行絕對定量分析。

　　2：miRNA 的定量與定性分析：

　　MicroRNA(miRNA)成熟體是由21—23個(gè)堿基構成的含有發(fā)夾結構的單鏈小分子RNA，長(cháng)度太短不能通過(guò)普通的實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行檢測。因此，我們通過(guò)加尾法(在miRNA的3’段加一個(gè)polyA尾巴)及頸環(huán)法(設計特殊的含有莖環(huán)結構的反轉錄引物，配合實(shí)時(shí)定量PCR引物及探針)可以精確檢測微量樣品中microRNA表達水平。

　　3：lncRNA的定量與定性分析：

　　長(cháng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)與mRNA相比是不編碼蛋白的，但又比miRNA要長(cháng)(大于200nt)，研究證明ncRNA 能在表觀(guān)遺傳、轉錄及轉錄后水平上調控基因表達，與人類(lèi)疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治有著(zhù)密切的聯(lián)系。我公司可設計特異性引物對lncRNA進(jìn)行定量分析。

　　4：定性分析

　　熒光定量PCR還可以用來(lái)檢測單核苷酸多態(tài)性(SNP)、點(diǎn)突變、等位基因以及DNA甲基化等。能夠簡(jiǎn)單快速地對目的基因進(jìn)行高特異性、高靈敏度的檢測，同時(shí)閉管操作的實(shí)時(shí)檢測可以有效防止反應產(chǎn)物的污染。

 

　　3.主要過(guò)程

 

 

　　4.服務(wù)說(shuō)明

　　1：在服務(wù)開(kāi)始前，請先咨詢(xún)我們公司。我們會(huì )針對您的實(shí)驗目的設計個(gè)性化的最優(yōu)實(shí)驗方案。

　　2：客戶(hù)提供的實(shí)驗材料必須在正確的條件下保存和運輸(上海本地客戶(hù)我們可以上門(mén)提取)。我們不推薦直接提供RNA或cDNA樣品，除非能證明提供的樣品質(zhì)量可以用于熒光定量PCR。

　　3：客戶(hù)需提供盡可能詳細的實(shí)驗背景信息(包括物種信息，目的基因信息等)。

　　4：客戶(hù)可以自己提供熒光定量PCR引物，也可以由我們設計并合成，但需收取相應費用。

　　5：為了確保實(shí)驗數據的可靠性，每個(gè)樣品我們都采用三復孔，且保證熔解曲線(xiàn)的單一性。

 

　　5.服務(wù)周期

　　實(shí)驗周期視具體的樣品數量及需測定的數據數目而定。

 

　　6.客戶(hù)所得

　　1：熒光定量PCR的原始數據及分析結果;

　　2：完整的實(shí)驗報告(包括實(shí)驗材料，步驟，結果分析等);

 

 

WesternBlot 服務(wù)

　　1.服務(wù)描述

　　Western Blot 實(shí)驗首先通過(guò)變性聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳將蛋白質(zhì)混合物進(jìn)行分離，然后將其轉移至固相支撐物(NC膜，PVDF膜)上。這時(shí)的蛋白質(zhì)是以非共價(jià)鍵形式吸附在固相支撐物上，固相支撐物經(jīng)目的蛋白的一抗和酶標二抗孵育后，即可通過(guò)底物顯色來(lái)檢測目的蛋白的表達。該方法是蛋白質(zhì)工程研究中的常規技術(shù)。

 

　　2.服務(wù)內容

　　1：樣品蛋白質(zhì)的抽提與定量;

　　2：摸索，優(yōu)化實(shí)驗條件并完成Western Blot 實(shí)驗;

　　3：圖片分析;

 

　　3.服務(wù)說(shuō)明

　　1：我們接受任何形式的實(shí)驗樣品(組織、細胞及蛋白質(zhì)混合溶液等);但客戶(hù)必須提供足量的滿(mǎn)足實(shí)驗要求的樣品。同時(shí)應注意避免樣品之間交叉污染，及樣品的反復凍融;

　　2：客戶(hù)需自己提供實(shí)驗用一抗，也可以由我公司代購(實(shí)驗完成后剩余抗體返還客戶(hù));

　　3：我們采用PVDF膜作為固相支撐物，每張膜可以檢測10個(gè)蛋白樣品(包括蛋白質(zhì)分子量標準)。

 

　　4.客戶(hù)所得

　　1：剩余的實(shí)驗樣品(包括客戶(hù)提供的一抗);

　　2：Western Blot曝光原始底片及處理后圖片;

　　3：完整的實(shí)驗報告;